Ruhr University Bochum Prof

Ruhr University Bochum prof. Dr. med. Ulrich Mittelkötter Miesto zamestnania: Katharinen - Nemocnica Unna Oddelenie všeobecnej a viscerálnej chirurgie Úloha terminálnych kináz c-jun N (JNK1 a JNK2) v modeli kolitídy s nízkou dávkou DSS Úvodná dizertačná práca na získanie doktorátu v odbore medicína na vysokej lekárskej fakulte v Porúrí Univerzita v Bochume, ktorú predstavila Elisabeth Frick z mesta Orsk/Orenburg 2009

JNK2 Obrázok

Dekan: Prof. Dr. Rečník G. Muhr: prof. Dr. Spolurozhodca U. Mittelkötter: Prof. Dr. A. Tannapfel Deň ústnej skúšky: 3. decembra 2009

Venované mojej rodine s vďačnosťou

3.1.1 Hodnotenie DAI: JNK1 -/- oproti JNK1 +/+. 33 3.1.2 Hodnotenie DAI: JNK2 -/- oproti JNK2 +/+. 34 3.2 Skóre poškodenia kryptomeny (CDS) - histologické hodnotenie. 35 3.2.1 Vyhodnotenie CDS: JNK1 -/- oproti JNK1 +/+. 35 3.2.2 Vyhodnotenie CDS: JNK2 -/- oproti JNK2 +/+. 36 3.2.3 Zhrnutie. 38 3.3 Vyhodnotenie imunofluorescencie. 39 3.3.1 Expresia CD8 vo Villi: JNK2. 39 3.3.2 Expresia CD4 vo Villi: JNK2. 41 4 Diskusia. 43 4.1 Inhibícia JNK a iných MAPK v liečbe IBD. 43 4.2 Kolitída DSS ako zvierací model. 44 4.3 Zhrnutie vlastných výsledkov. 45 4.4 Analýza vlastných výsledkov na základe súčasných štúdií. 47 4.5 Zhrnutie. 50 5 Bibliografia. 52 Poďakovanie CV 2

Zoznam skratiek Obrázok Obrázok AK protilátka AS aminokyselina ATP adenozíntrifosfát Bcl-1 B-bunková leukémia/lymfóm 1 alebo približne CARD doména náboru kaspázy CD zhluk diferenciácie CDS Skóre poškodenia kryptomien CED zápalové ochorenie čriev CU ulcerózna kolitída CY2 karbocyanín CY3 Indokarbocyanín deň DAI Index aktivity chorôb DAPI 4, 6-diamino-2-fenylindol dihydrochlorid Kyselina DMD-pimlová Kyselina D-glu-meso-diamino-pimelová DNA deoxyribonukleová kyselina DSS dextrán síran sodný ELK1 transkripčný faktor ERK extracelulárny signál regulovaný kináza a kol. et alii g gramov GALT spojené s lymfatickým tkanivom spojené s črevom G-CSF faktor stimulujúci kolónie granulocytov GM-CSF faktor stimulujúci kolónie granulocytov a makrofágov GMO geneticky modifikované organizmy HE hematoxylín/eozín HLA ľudský leukocytový antigén ICAM-1 medzibunková adhézna molekula IEZ IFN interferónové epitelové bunky IF imunofluorescencia Ig imunoglobulín II interleukín IMAC interstinálne makrofágy iv intravenózny JIP JNK-interagujúci proteín JNK c-jun NH2 terminálna kináza kda Kilodalton ko knock out 1 liter LBP LPS-väzbový proteín LPS lipopolysacharid LRR bohaté na leucín opakovania M molárny (mol/l) 3

MAPK mitogénom aktivovaná proteínkináza MC Crohnova choroba MCP-1 monocytový chemoatraktantový proteín 1 MHC hlavný histokompatibilný komplex min minúta (y) milión MIP1 makrofágový zápalový proteín ml mililiter NBD nukleotidová väzbová doména NF-kB nukleárny faktor-kb NK bunky prirodzené zabíjačské bunky NOD Nukleotidová väzbová a oligomerizačná doména PBS fosfátom tlmený soľný roztok, fosfátový tlmivý roztok PCR polymerázová reťazová reakcia PP Peyerové plaky PRR receptory rozpoznávania patogénov RNA ribonukleová kyselina RT izbová teplota SAPK stresovo aktivovaná proteínkináza SCID závažná kombinovaná imunitná nedostatočnosť SEM štandardná chyba priemerného STAT-3 signálneho prevodníka a aktivátora transkripcie TGF-beta transformujúci rastový faktor beta Th 1/2 bunky T-pomocné bunky TJ tesné spojenie TLR toll-like receptor TNBS kyselina trinitrobenzénsulfónová TNF tumorový nekrotizujúci faktor U jednotky cez noc oproti versus vwf von Willeband faktor WT divoký typ napr. napríklad u micro 4

Zoznam tabuliek Tabuľka 1: Prehľad niektorých zvieracích modelov kolitídy. 21 Tabuľka 2: Výpočet klinického skóre z parametrov úbytok hmotnosti, kvalita stolice a krv v stolici (upravené podľa Cooper et al., 1993). Tabuľka 3: Histologické skóre poškodenia sliznice (upravené podľa Egger, 1997). 28 Tabuľka 4: Primárne protilátky. 31 Tabuľka 5: Sekundárne protilátky. 31 5

Zoznam obrázkov Obrázok 1: Klasická štruktúra kaskády mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAPK) [22]. 15 Obrázok 2: Molekulárna štruktúra DSS. 20 Obrázok 3: Obrázky čreva. 26 Obrázok 4: Index aktivity chorôb: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 34 Obrázok 5: Index aktivity chorôb: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 35 Obrázok 6: Vyhodnotenie skóre poškodenia krypty: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 36 Obrázok 7: Vyhodnotenie skóre poškodenia krypty: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 37 Obrázok 8: Reprezentatívne obrazy HE z distálneho hrubého čreva. 38 Obrázok 9: Expresia CD8 vo vilí distálneho hrubého čreva (JNK2). 40 Obrázok 10: IF obrázky na expresiu CD8 v JNK2 v distálnom hrubom čreve. 40 Obrázok 11: Expresia CD4 vo vilách distálneho hrubého čreva (JNK2). 41 Obrázok 12: IF obrázky na expresiu CD4 v JNK2 v distálnom hrubom čreve. 42 6

Sériovo prepínané kaskády krokov fosforylácie, ktoré zosilňujú odpoveď progresiou prenosu (zosilnenie signálu). Spomedzi veľkej skupiny proteínkináz nedávno získala mimoriadny význam rodina takzvaných mitogénom aktivovaných proteínkináz (MAPK) [59, 66]. Patria sem c-jun N-terminálna kináza (JNK) a p38 kináza. Obrázok 1: Klasická štruktúra kaskády mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAPK) [22]. JNK sa aktivuje pomocou MKK4 a MKK7. Tieto MAPKK sú zase aktivované rôznymi MAPKinázovými kinázovými kinázami (MAPKKK), ktoré sú zase stimulované stimulmi, ako sú rastové a stresové faktory. 15