TSH ELISA

.D D S. DIAGNÓZA Str. Vatra Luminoasa, č. 45, sekta. 2, Bukurešť telefón: 0213440771, fax: 0214104009, e-mail: [email protected] Návod na použitie TSH ELISA Priame imunoenzymatické stanovenie tyreotropínu (TSH) v ľudskom sére Variant 2.2 96 LOT testy TSH018 var. 2,2 1

elisa

OBSAH Účel 3 1 Klinický význam 3 2 Princíp 4 3 Komponenty súpravy 4 4 Potrebné materiály, ktoré nie sú súčasťou súpravy 4 5 Príprava reagencií 5 6 Podmienky skladovania 5 7 Biologický test 5 8 Bezpečnostné opatrenia 5 9 Pracovný postup 6 10 Kontrola kvality 8 11 Výpočet výsledkov 8 12 Príklad štandardnej krivky 8 13 Očakávané hodnoty 9 14 Výkon a charakteristiky 9 15 Nakladanie s odpadmi 10 16 Bibliografia 11 17 Schéma analýzy 12 2

Odporúča sa, aby si každé laboratórium stanovilo vlastné rozpätie normálnych hodnôt v závislosti od populácie. 14. VÝKON A CHARAKTERISTIKA a) Presnosť Vnútrosériové variácie Stanovené meraním koncentrácie TSH v replikáte (20x) s použitím 2 kontrolných sér na rôznych úrovniach v jednej analýze. Kontrola n Priemerná koncentrácia (miu/ml) CV (%) 1 20 1,96 5,46 2 20 10,59 6,8 Medzisériová variácia Stanovená meraním koncentrácie TSH v replikáte (10x) s použitím 2 kontrolných sér a tri rôzne šarže reagencií, testované jedenkrát denne počas 20 dní. Kontrola n Priemerná koncentrácia (ml/ml) CV% 1 40 2,21 4,97 2 40 10,02 5,18 b) Citlivosť. Citlivosť sa stanovila použitím nulového (S0) štandardu v replikáte (20X) v tej istej analýze. Minimálna detegovaná koncentrácia TSH bola 0,01 μl/ml. c) Špecifickosť protilátok (krížová reaktivita). Krížová reaktivita tyreotropínových protilátok je uvedená v nasledujúcej tabuľke: 10

Látka Krížová reaktivita,% TSH 100% hcg 0% hgh 0% LH 0,021% FSH 0,014% d. Korelácia s inými metódami Súprava sa porovnala s Roche Cobas TSH pomocou vzoriek od 121 pacientov. Korelácia sa uskutočňovala metódou lineárnej regresie: y = 0,094 + 1,0138x s korelačným koeficientom 0,991. 15. ODPADOVÉ HOSPODÁRSTVO Činidlá a odpad musia byť použité a zneškodnené v laboratórnom okruhu podľa platných legislatívnych noriem. 16. BIBLIOGRAFIA 1. Dinu V., Trutia E., Cristea-Popa E., Popescu A., Medical Biochemistry Small pojednanie, Ed. Medicala, 1996. 2. Laboratórne analýzy a ďalšie diagnostické výskumy, Ed. MedicArt, 2007. 3. Cucuianu, M., Crisnic I., Plesca-Manea L., Clinical Biochemistry, Ed. Dacia, 1998. 11

SCHÉMA ANALÝZY TSH Príprava testu Príprava reagencií a vzoriek podľa opísaného postupu. Výber počtu jamiek a ich vloženie do špeciálne navrhnutej podpory. Pracovný postup Štandardná kontrolná vzorka 0-5 Štandardná 50 μl - - 0-5 kontrola - 50 μl - Vzorka - - 50 μl Roztok konjugátu 50 μl 50 μl 50 μl Doštičku jemne pretrepte po dobu 30 sekúnd, aby sa premiešala. Jamky zakryte alobalom. Inkubujte 60 minút. pri 37 ° C. 5-krát premytie 350 ul premývacieho roztoku pripraveného podľa 5.2. Štandardná kontrolná vzorka 0-5 substrát 100 100 l 100 ul 100 ul TMB Zakryte jamky. Inkubujte 20 minút pri izbovej teplote 22-28 ° C v tme. Štandardná kontrolná vzorka 0-5 Zastavovací roztok 50 50 l 50 μl 50 μl Doštičku jemne pretrepávajte po dobu 30 sekúnd, aby sa roztoky úplne premiešali. Odčítajte absorbanciu roztoku v jamkách pri 450 nm s referenčnou hodnotou 620-630 nm, maximálne do 15 minút po ukončení reakcie, pomocou spektrofotometra na mikrodoštičkách. 12