Prečo by sa mali pred odberom pupočníkovej krvi odstrániť červené krvinky
Od začiatku vývoja poľa začali laboratóriá, ktoré spracúvajú pupočníkovú krv na uskladnenie, odstraňovať plazmu (vyčerpanie plazmy) a červené krvinky (odbúravanie červených krviniek) pred kryokonzerváciou koncentrátu obsahujúceho kmeňové bunky.
Hlavným dôvodom plazmatického klírensu bolo zníženie objemu finálnej jednotky, aby sa uľahčila kryogenizácia. Plazma obsahuje bielkoviny, ale nie kmeňové bunky, takže nie je potrebná pri transplantačných terapiách.
Podobne červené krvinky nepomáhajú pri transplantácii, takže nie sú ani potrebné. V skutočnosti môže byť prítomnosť červených krviniek počas transplantácie nebezpečná z niekoľkých dôvodov. Po prvé, aj keď majú pacient a darca „dokonalú“ kompatibilitu, respektíve majú rovnakú typológiu HLA (ľudský leukocytový antigén), môžu mať odlišné krvné skupiny. V takýchto prípadoch, ak sa infúzia červených krviniek darcu dostane do pacienta, môže to spôsobiť „vedľajšie účinky“. Tieto reakcie možno minimalizovať hydratáciou pacienta.
Najdôležitejším dôvodom, prečo sú červené krvinky pre pacienta nebezpečné, je to, že pri použití nemusia mať tendenciu prežiť proces rozmrazovania. Červené krvinky počas kryokonzervácie lyzujú - bunková membrána praskne, obsah bunky vrátane hemoglobínu pretečie. Tieto zložky môžu zhoršiť stav pacientov ovplyvnením funkcie obličiek s komplikáciami, ktoré môžu byť smrteľné.
Zo všetkých vyššie uvedených dôvodov sa odstránenie červených krviniek z pupočníkovej krvi pred kryokonzerváciou stalo štandardným postupom medzi verejnými a súkromnými bankami kmeňových buniek.
V súčasnosti väčšina automatizovaných systémov spracovania používaných v laboratóriách bánk kmeňových buniek na celom svete vykonáva depléciu (elimináciu) plazmy a červených krviniek s dobrou obnovou kmeňových buniek a progenitorov potrebných na štepenie (nukleové bunky a CD34 +). Čiastočné vyčerpanie červených krviniek spôsobuje ich oveľa menšiu prítomnosť v spracovaných jednotkách ako v čerstvo odobratej pupočníkovej krvi (celej), takže konečný produkt má farbu ružovú alebo svetločervenú a nie tmavočervenú ako farba krvi v čase odberu.
Jediným argumentom na to, aby sa pred uskladnením pupočníkovej krvi nevyčerpali červené krvinky, je to, že počas centrifugácie môže dôjsť k strate niektorých buniek - čo je krok potrebný na oddelenie rôznych zložiek krvi. Väčšina buniek sú však granulocyty a nie progenitory a nie sú potrebné na štepenie. Na druhej strane, ak sa červené krvinky neodstránia z pupočníkovej krvi pred uskladnením, musia sa odstrániť „umytím“ po kryokonzervácii a rozmrazení, a to ešte pred použitím. Tento premývací krok je ďalšou príležitosťou na stratu buniek.
Jednotky pupočníkovej krvi, ktoré nemajú odstránené červené krvinky, sú pre pacientov oveľa ťažšie použiteľné. Po rozmrazení kryogénnej jednotky sa červené krvinky rozpadnú. Lekárska literatúra uvádza závažné reakcie v prípadoch, keď boli tieto jednotky podané infúziou bez zriedenia alebo premytia. Súčasné odporúčania z Národného programu darcov kostnej drene NEPOUŽÍVAJÚ použitie jednotiek plnej krvi bez ich umývania alebo aspoň riedenia.
Umývanie celých jednotiek pupočníkovej krvi po ich rozmrazení je technickou výzvou. Voľný hemoglobín a bunkové zvyšky uvoľňované pri pretrhnutí membrán červených krviniek sťažujú rozlíšenie medzi nukleárnymi bunkami (vrátane kmeňových buniek), ktoré si chcú laboratórni odborníci uchovať, a zvyškovým „supernatantom“, ktorý je potrebné odstrániť. Separácia rôznych typov buniek po rozmrazení je náročnejšia, pretože dochádza k väčším stratám buniek ako pri spracovaní čerstvo odobratej pupočníkovej krvi. Okrem toho je ťažké interpretovať testy jednotky po rozmrazení.
Záverom možno povedať, že vzhľadom na problémy spôsobené manipuláciou s plnou krvou po kryokonzervácii a rozmrazení, či už v bankách kmeňových buniek, alebo v terapeutických centrách, súčasné štandardy zahŕňajú spracovanie na čiastočné vyčerpanie červených krviniek a elimináciu plazmy pred kryokonzerváciou. Všetky verejné banky s licenciou FDA (Food and Drug Administration) navyše spracovávajú pupočníkovú krv na odstránenie červených krviniek a plazmy pred kryokonzerváciou koncentrátu kmeňových buniek.
- Barker JN, Byam C, Scaradavou A. Ako liečim: výber a získanie nesúvisiacich štepov krvnej krvi. Krv 2011; 117: 2332-2339
- Barker JN, Scaradavou A. Kontroverzia jednotiek pupočníkovej krvi plných červených krviniek. Blood 2011; 118: 480 [List do krvi; Odpoveď]
- Odporúčania NMDP na prípravu jednotiek pupočníkovej krvi plných RBC na infúziu, protokol NMDP IND 10-CBA, verzia 7.0
