Sprievodca stážou v Matrix Engineering - PDF na stiahnutie zadarmo

Pokyny pre stáž Matrix Engineering WS 2012/13 Vedenie stáže: Spoluautori: Dr. Katja Franke Michael Ansorge Liv Kalbitzer Tina König Andreas Müller Christina Müller Fakulta biovied, farmácie a psychológie Ústav biochémie Profesorstvo pre biofyzikálnu chémiu

matrix

Obsah Pokyny na zaistenie bezpečnosti a ochrany zdravia (krátka forma) 5 Základy experimentov 1 až 4 6 Experiment 1 - Izolácia kolagénu typu I 9 Prípravy experimentu 2-4 Príprava matíc kolagénu a fibrínu 12 Pokus 2 - Kinetika tvorby vlákien a modifikácia siete s heparínom 14 Pokus 3 - Analýza mikroštruktúry ECM 17 Pokus 4 - Migrácia a morfológia buniek 20 Pokus 5 - Mikroskopia ťahovej sily buniek 22

Obrázok 11: Výroba gélovej vrstvy, polymerizačný roztok sa napipetuje na Sigmacote-DG a potom sa uzavrie reaktívnym DG. Obrázok 12: Povrchová funkcionalizácia pomocou akrylového silánu (3-akryloxypropyltrimetoxysilánu) a následná aplikácia polymerizačného roztoku vedie k kovalentnému pripojeniu polyakrylamidového gélu na krycí sklíčko. 4. Odstráňte Sigmacote DG pomocou pinzety 5. Gély namočte na 30 minút do H2O 6. Gély vysušte vo vákuovej sušiarni asi 45 minút pri izbovej teplote 4. Odstreďujte povlak (nanášaním polymérneho povlaku) 1. Pripravte roztok ˆ 0,14% hmotn./hmotn. Filtrujte PSMA (100 000 g/mol) v THF (roztok (PTFE striekačkový filter, veľkosť pórov 0,2 µm) 2. Odstreďujte povlak pri 4000 ot/min, 1500 ot/min/s, 20 s 3. Prilepte na sklenené krúžky pomocou Eukitt 5. Nechajte gély napučať 1 .DG umiestnite do veľkej Petriho misky 2. Pridajte PBS 3. Petriho misku utesnite Paralm a vložte na noc do chladničky.